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分光光度計的測量原理

更新時(shí)間:2013-07-22   點(diǎn)擊次數:3200次
      光度計是每個(gè)化學(xué)分析實(shí)驗室*的常用儀器設備之一,在各種定量和定性分析中得到了廣泛的應用。

      分光光度計就是利用分光光度法對物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器。

      而分光光度法則是通過(guò)測定被測物質(zhì)在特定波長(cháng)處或一定波長(cháng)范圍內光的吸收度,對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。 常用的波長(cháng)范圍為:(1)200~400nm的紫外光區,(2)400~760nm的可見(jiàn)光區,(3)2.5~25μm(按波數計為4000cm~400cm)的紅外光區。所用儀器為紫外分光光度計、可見(jiàn)光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度,所有儀器應按照國家計量檢定規程或本附錄規定,定期進(jìn)行校正檢定。 單色光輻射穿過(guò)被測物質(zhì)溶液時(shí),被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長(cháng)度)成正比,其關(guān)系如下式:

      A=-log(I/I。)=-lgT=kLc

      式中 :A 為吸收度;

      I。為入射的單色光強度;

      I 為透射的單色光強度;

      T 為物質(zhì)的透射比;

      k 為吸收系數;

      L 為被分析物質(zhì)的光程


      c 為物質(zhì)的濃度

      物質(zhì)對光的選擇性吸收波長(cháng),以及相應的吸收系數是該物質(zhì)的物理常數。當已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數后,可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區,除某些物質(zhì)對光有吸收外,很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收,但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測定,故又稱(chēng)比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時(shí)應用標準品或對照品同時(shí)操作。

      分光光度計已經(jīng)成為現代分子生物實(shí)驗室常規儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長(cháng)濃度的定量。儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統組成。
www.gdd007.cn  分光光度計廠(chǎng)家
      

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